學(xué)術(shù)動(dòng)態(tài)
固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工藝研究
孫立樞
西北大學(xué)
摘要：本文以工業(yè)化生產(chǎn)為目的，研究了用Fmoc固相法人工合成丙型肝炎疫苗多肽(以下簡(jiǎn)稱疫苗多肽)的生產(chǎn)工藝，比較了Wang樹脂和二氯三苯甲基樹脂(以下簡(jiǎn)稱二氯樹脂)在固相合成中的的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，以及粗產(chǎn)物肽和目標(biāo)肽的產(chǎn)率和純度；創(chuàng)造性的引入Nα-Dmb基團(tuán)，提高了困難氨基酸Val的連接率；優(yōu)化了脫保護(hù)的策略以及切割試劑的選擇；通過質(zhì)譜鑒定分析所得目標(biāo)多肽的分子量，用RP-HPLC進(jìn)行粗肽的分析和純化，系統(tǒng)完整的建立了整套合成純化工藝路線及相關(guān)的工藝參數(shù)，為后續(xù)的工業(yè)化生產(chǎn)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。采用該合成純化工藝路線，以二氯樹脂為載體，合成的粗肽產(chǎn)率達(dá)到了90.76％，純化后的目標(biāo)肽產(chǎn)率為63.02％純度達(dá)到了98.5％，并實(shí)現(xiàn)了18克每批的合成量。二氯樹脂以其高效率、低成本、產(chǎn)品的高純度完全符合工業(yè)化生產(chǎn)疫苗多肽的各項(xiàng)經(jīng)濟(jì)技術(shù)指標(biāo)。 論文包括以下四個(gè)部分： 1文獻(xiàn)綜述部分，簡(jiǎn)述了丙型肝炎疫苗的研究現(xiàn)狀，詳細(xì)介紹了多肽固相合成技術(shù)中的合成方法、分離純化與鑒定技術(shù)，最后概述了多肽類藥物的應(yīng)用情況與研究展望。 2采用Fmoc固相法人工合成了疫苗多肽，比較了兩種樹脂在合成過程中的異同點(diǎn)，對(duì)合成過程中的幾個(gè)重要步驟和難點(diǎn)進(jìn)行了優(yōu)化和改進(jìn)，如針對(duì)困難氨基酸Val的連接，設(shè)計(jì)了引入Nα-Dmb基團(tuán)的獨(dú)特合成策略，提高了連接率及切割效率，確定了合成工藝中相關(guān)的各項(xiàng)工藝技術(shù)參數(shù)。最后用二氯樹脂做為載體進(jìn)行了18克每批的疫苗多肽合成。 3用RP-HPLC進(jìn)行粗肽的分析和純化，根據(jù)疫苗多肽的理化性質(zhì)采用乙腈—水的流動(dòng)相體系，并確定了RP-HPLC分析和純化的條件。 4總結(jié)了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定了疫苗多肽合成、純化工藝路線及相關(guān)的工藝技術(shù)參數(shù)。
關(guān)鍵詞： 固相法;丙型肝炎疫苗多肽;多肽純化;
專輯： 醫(yī)藥衛(wèi)生科技
專題： 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)
分類號(hào)： R392
導(dǎo)師： 陳五嶺;
學(xué)科專業(yè)： 微生物學(xué)
碩士電子期刊出版信息： 年期：2007年第04期網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2007-03-16——2007-04-15
固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工藝研究|孫立樞|西北大學(xué)
固相法|丙型肝炎疫苗多肽|多肽純化
文章目錄
摘要
Abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
1.1 丙型肝炎簡(jiǎn)介
1.1.1 丙型肝炎病毒基因的多樣性
1.1.2 治療方法
1.1.3 HCV疫苗
1.1.4 DNA疫苗
1.1.5 HCV疫苗研究的挑戰(zhàn)
1.2 多肽合成技術(shù)
1.2.1 固相法多肽合成
1.2.2 固相法中的接肽反應(yīng)方法
1.2.3 氨基酸保護(hù)基
1.2.4 載體樹脂
1.2.5 脫去保護(hù)基和樹脂
1.2.6 固相多肽合成中連接效率的檢測(cè)方法
1.2.7 多肽固相合成法中存在的問題及解決策略
1.2.8 固相多肽合成中新技術(shù)的應(yīng)用
1.3 合成多肽的分離與分析
1.3.2 分析方法
1.4 多肽藥物
1.4.1 多肽藥物的藥代動(dòng)力學(xué)與其檢測(cè)方法
1.4.2 多肽藥物的研究開發(fā)
第二章 疫苗多肽的固相合成
2.1 儀器和設(shè)備
2.1.1 試劑
2.1.2 多肽合成實(shí)驗(yàn)裝置圖
2.2 使用載體Wang樹脂合成疫苗多肽
2.2.1 Wang樹脂簡(jiǎn)介
2.2.2 樹脂的活化
2.2.3 第一個(gè)氨基酸殘基的連接
2.2.4 樹脂上殘余反應(yīng)基團(tuán)的封閉
2.2.5 剩余氨基酸殘基的連接
2.2.6 脫保護(hù)方法
2.2.7 檢測(cè)方法
2.2.8 樹脂的切割
2.2.9 合成粗肽的MALDI-TOF MS鑒定
2.3 使用載體二氯樹脂合成疫苗多肽
2.3.1 二氯樹脂簡(jiǎn)介
2.3.2 其他合成環(huán)節(jié)
2.4 結(jié)果與討論
2.4.1 保護(hù)基的選擇
2.4.2 載體樹脂的選擇
2.4.3 第一步的連接效率
2.4.4 第一步連接過程的不同
2.4.5 困難氨基酸Val的連接
2.4.6 未反應(yīng)氨基酸的封閉
2.4.7 脫保護(hù)策略
2.4.8 切割試劑的選擇
2.4.9 粗肽的質(zhì)譜鑒定
2.4.10 合成結(jié)果
2.4.11 擴(kuò)大規(guī)模的疫苗多肽合成
2.5 小節(jié)
第三章 疫苗多肽的分析與純化制備
3.1 前言
3.2 實(shí)驗(yàn)部分
3.2.1 儀器設(shè)備
3.2.2 試劑及藥品
3.2.3 粗肽的分析
3.2.4 粗肽的純化
3.3 結(jié)果與討論
3.3.1 粗肽分析圖
3.3.2 雜質(zhì)的產(chǎn)生
3.3.3 粗肽純化圖
3.3.4 目標(biāo)肽的純度與產(chǎn)率
3.4 小節(jié)
第四章 結(jié)論與展望
4.1 結(jié)論
4.2 展望
參考文獻(xiàn)
中英文詞匯對(duì)照表
致謝
固相法合成丙型肝炎疫苗多肽工藝研究|孫立樞|西北大學(xué)
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